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NRC標(biāo)準(zhǔn)品CRM-ATX魚(yú)腥藻毒素校準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備
  • 更新日期:2024-07-03      瀏覽次數(shù):298
    • 用途:CRM-ATX是一種校準(zhǔn)溶液認(rèn)證的參考物質(zhì)(CRM),設(shè)計(jì)用于ATX-a的分析方法開(kāi)發(fā)和準(zhǔn)確定量。CRM濃度使其適用于制備稀釋系列,用于儀器校準(zhǔn),如通過(guò)紫外吸收(LC-UV)、熒光(LC-FL)或質(zhì)譜(LC-MS)檢測(cè)的液相色譜法,以及用于加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的對(duì)照樣品。

      制備:ATX-a是從Aphanizomenon issatschenkoi的藻類培養(yǎng)物中分離出來(lái)的[3]。從細(xì)胞中提取毒素,通過(guò)色譜純化,然后真空干燥成無(wú)水形式[4,5]。CRM溶液通過(guò)將純化的ATX-a溶解在用0.01%乙酸脫氣的甲醇/水(9:91,v/v)中來(lái)制備。在氬氣下,用涂有聚四氟乙烯的攪拌棒和磁力攪拌器將溶液充分混合。將等分試樣分配到預(yù)先填充氬氣的琥珀色玻璃安瓿中,然后立即對(duì)其進(jìn)行火焰密封。每個(gè)安瓿含有大約0.5毫升溶液。

      結(jié)構(gòu)確認(rèn)和純度評(píng)估:

      通過(guò)以下技術(shù)檢查毒素的純度:500 MHz 1H NMR光譜、LC-MS[6]、LC-UV、毛細(xì)管電泳紫外檢測(cè)(CE-UV)[7]和液相色譜化學(xué)發(fā)光氮檢測(cè)(LC-CLND)[8]。通過(guò)核磁共振波譜[9]和四極飛行時(shí)間(QToF)質(zhì)譜法證實(shí)了ATX-a的分子結(jié)構(gòu)。ATX-a的1H NMR光譜如圖1所示。在166.12269 Da處獲得了[M+H]+離子的準(zhǔn)確質(zhì)量,其在166.12264 Da的理論單同位素質(zhì)量的0.05 mDa(Δ=

      0.30ppm)。還獲得了[M+H]+離子的串聯(lián)質(zhì)譜,如圖2所示。使用NMR、LC-MS、LC-UV和LC-CLND來(lái)估計(jì)ATX-a的純度。沒(méi)有觀察到主要雜質(zhì)。

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