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預(yù)期用途

CRM-GYM-b是一種經(jīng)過認(rèn)證的校準(zhǔn)溶液，專為GYM的分析方法開發(fā)和準(zhǔn)確定量而設(shè)計(jì)。CRM-GYM-b的濃度使其適用于制備用于校準(zhǔn)液相色譜（LC）和液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）儀器的稀釋系列，以及用于回收實(shí)驗(yàn)的貝類對照樣品的加標(biāo)。

CRM-GYM-b的制備

GYM是在Cawthron研究所（Nelson，New Zealand）從賣方卡氏菌的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)物中分離出來的。通過一系列色譜步驟對其進(jìn)行純化。CRM溶液是通過將純GYM溶解在脫氣的高純度甲醇（含有0.05%三氟yi酸）中來制備的。將該溶液用Teflon攪拌棒和磁力攪拌器充分混合，同時在氬氣氛下的冰浴中冷卻。將等分試樣分配到琥珀色玻璃安瓿中，并在氬氣下進(jìn)行火焰密封。然后對安瓿進(jìn)行標(biāo)記、包裝，并立即轉(zhuǎn)移到-80°C下長期儲存。

結(jié)構(gòu)確認(rèn)和純度評估

通過1H核磁共振（NMR）證實(shí)了用于制備CRM-GYM-b的GYM的結(jié)構(gòu)和純度（圖1）。LC-MS/MS產(chǎn)物離子光譜顯示了GYM的碎裂現(xiàn)象（圖2）。

使用LC-MS對GYM儲備溶液進(jìn)行純度評估。雖然沒有觀察到主要雜質(zhì)，但檢測到許多GYM相關(guān)雜質(zhì)（M/z 524.4處的[M+H]+）的含量非常低（<0.1%）（圖3）。從GYM中分離出一種早期洗脫的未知GYM異構(gòu)體，占GYM總濃度的<1%，并使用不同的等度條件通過LC-MS進(jìn)行檢測（圖4）。

同質(zhì)性

在填充系列中選擇代表性數(shù)量的安瓿（n=24），以確定CRM-GYM-b的均勻性。通過LC-MS進(jìn)行分析。瓶間的變化被測量為小于一種溶液的重復(fù)分析的變化（n=24，RSD<3%），因此在整個安瓿范圍內(nèi)證明了可接受的均勻性。

穩(wěn)定性研究

CRM-GYM-b在甲醇（0.05%TFA）中的短期穩(wěn)定性使用反向等時穩(wěn)定性研究設(shè)計(jì)[9]進(jìn)行評估，參考溫度為-80°C。在30天的時間里，在高達(dá)+37°C的溫度下沒有觀察到GYM的降解，這表明在短期內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。在6個月后的一項(xiàng)長期研究中，+37°C下的降解確實(shí)變得顯著。使用-12°C斜率的標(biāo)準(zhǔn)誤差，確定了與長期穩(wěn)定性評估相關(guān)的不確定度，以納入CRM-GYM-b的最終組合不確定度。長期穩(wěn)定性的相對不確定度（µlts）為1.14%。CRM-GYM-b的建議儲存溫度為-12°C或更低。

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