最近2019中文字幕电影免费看,成年免费a级毛片免费看无码,国产精品天天看天天做夜夜爽,国产毛多水多做爰爽爽爽

產(chǎn)品分類
您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞增殖與毒性檢測(CCK8 法)
細(xì)胞增殖與毒性檢測(CCK8 法)
  • 更新日期:2023-04-04      瀏覽次數(shù):1805
    • 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
      通過檢測細(xì)胞活力來驗(yàn)證目的基因?qū)?xì)胞增殖的影響,或驗(yàn)證某種藥物對(duì)細(xì)胞的毒性。

      二、實(shí)驗(yàn)原理
      Cell Counting Kit-8(簡稱 CCK8) 
      試劑中含有 WST-8。活細(xì)胞特別是增殖期細(xì)胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能夠使 WST-8 還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測定其吸收值,即可間接反映細(xì)胞增殖情況。

      三、實(shí)驗(yàn)步驟
      1. 將細(xì)胞以 104-105 個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在  96 孔板中,加入 100μL 
      培養(yǎng)基,含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細(xì)胞 24 小時(shí)。
      2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。
      3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間(如 6、12、24 或 48 小時(shí))。
      4. 向板的每個(gè)孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
      5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時(shí)。
      6. 在讀板之前,在定軌振蕩器上輕輕混勻。
      7. 使用酶標(biāo)儀測量 450nm 處的吸光度。

      四、常見問題及解答
      Q1:做細(xì)胞活性檢測時(shí),每孔應(yīng)該接種多少個(gè)細(xì)胞?
      A:當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時(shí),貼壁細(xì)胞一般最小接種量為 1,000 個(gè)/孔 (100 μL 
      培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,因此推薦接種量不低于 2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基),當(dāng)然,也有部分極其靈敏的試劑盒或可檢測更少量的細(xì)胞。

      Q2:若是使用 6 孔或者 24 孔板進(jìn)行試驗(yàn),CCK 試劑使用量怎么樣呢?
      A:如果要使用 6 孔板或 24 孔板實(shí)驗(yàn),請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK8 溶液。

      Q3:培養(yǎng)基的本底顏色如酚紅會(huì)不會(huì)影響細(xì)胞活性的檢測呢?
      A:不會(huì)的,培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí),通過扣除空白孔中本底的吸光值而消去,因此不會(huì)對(duì)檢測造成影響。

      Q4:只可以在 450nm 波長處測 OD 值嗎?
      A:可以在 450nm 波長處測 OD 值,但是若無此波長的濾光片,可選擇吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片,但是 450 nm 濾光片的檢測靈敏度最高。

      Q5:若是暫不檢測 OD 值,該如何處理?
      A:若暫時(shí)不測定 OD 值,可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCL 溶液或者 1% w/v 
      SDS 溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24 小時(shí)內(nèi)測定,吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

      Q6:在實(shí)驗(yàn)中 OD 值太高,怎么解決?
      A:CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時(shí)間由 2 小時(shí)縮短為 1 小時(shí)。此外,可適當(dāng)減少細(xì)胞的數(shù)量。

      Q7:應(yīng)該每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎?
      A:建議每次做。雖然細(xì)胞是一樣的,但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣。對(duì)于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞,建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    24小时日本在线www免费的 | 精品一区二区三区四区五区六区| 亚洲色无码a片一区二小说| 国产重口老太和小伙A片| 亚洲精华国产精华液| 日本一区二区三区视频| 国产精品18久久久久久欧美网址| 狠狠色综合网站久久久久久久| 亚洲国产精品日韩AV不卡在线| 亚洲成色在线综合网站| 日日噜噜噜噜夜夜爽亚洲精品| 欧美精品videoss另类日本| 国产精品久久久久9999赢消| 久久丫精品国产亚洲AV| 亚洲白嫩小受男同GV在线观看 | 欧洲无码一区二区三区在线观看| 成年女人毛片免费视频| 强奷人妻日本中文字幕| 色哟哟免费精品网站入口| 美妙人妻系列100部| 美国色情三级欧美三级| 国产成人av一区二区三区不卡 | av无码久久久久不卡蜜桃| 日本精品videosse×少妇| 极品人妻老师的娇喘呻吟| 免费 成 人 黄 色 在线观看| 亚洲综合精品香蕉久久网| 成人电影在线免费观看| 蜜桃传媒一区二区亚洲av婷婷| 亚洲国产精品精华液| 国产精品99亚发布| 国偷自产AV一区二区三区接| 亚洲人成无码网站在线观看 | 69久久无码一区人妻A片| 国产精品久久久久无码av色戒| 十大禁用的免费游戏手游中文| 四虎影视www在线观看免费| 亚洲成色WWW久久网站| 性色AV无码久久一区二区三区| 欧美又黄又嫩大片a级| 色综合99久久久无码国产精品|